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假阳问题汇总-技术专题

2019-09-05 17:15:33

1未标记上的荧光微球:微球聚集,周围具有大量的负电荷,当样本爬过金垫,微球随着 向上跑,在 T 线位置只要碰到带有正电荷的蛋白,即发生反应,形成假阳线条。 解决方法:检查标记过程,BSA 封闭 

2、电荷作用:荧光微球带有负电荷,当遇上带有正电荷的蛋白,易发生非特异性结合反应, 导致假阳。反应环境为酸性时,已发生此类结合。 解决方法:改变 pH 和盐度

3、疏水作用:抗原抗体结合以及和微球结合都需要用到疏水作用力,当反应环境中存在疏 水物质时,易和胶体金或抗原抗体通过疏水作用力结合,产生假阳结果,如标本里的一些脂 肪,细胞碎片,细菌等等。 解决方法:用表面活性剂或亲水聚合物进行处理。 

4、硫醇类物质的存在(S-H 键起作用

5、抗原抗体作用(内源性物质):此类作用是指标本里面含有能和标记材料/包被材料发生 免疫反应的非目标物的其他物质导致的假阳结果。 解决方法:在样品垫或金子垫或硝酸纤维素膜上加入相应的抗体,将这类物质在 T 线前消除 掉。

①类风湿因子 人血清中 IgM、IgG 型类风湿因子(RF)可以与 ELISA 系统中的捕获抗体及酶标记二抗的 FG 段直接结合,从而导致假阳性解决该情况的办法是:(1)用 F(ab)2 替代完整的 IgG;(2)标本用预先热变性(63℃,10min)IgG 的固相吸附剂处理(将热变性 IgG 加入到标本稀释液中同样有效);(3)检测抗原时,可以用 2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中,使 RF 降解。

②补体如果在包被和标记过程中,使用的抗体的 FC 段的补体 Clq 分子结合位点被暴露出来,而易使 Clq 可以将补体和抗体二者连接起来,造成假阳性现象。 解决的方法是:(1)用 EDTA 稀释标本;(2)用 53℃、10min 加热血清使 Clq 灭活。

③嗜异性抗体 人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig(s)结合的天然嗜异性抗体,易和包被和标记的 抗体产生反应,能造成假阳性。解决的办法是:可在标本稀释液中加入过量的动物 Ig(s),但加入量不足或亚类不同时无效。

④医源性诱导的抗鼠 Ig(s)抗体(嗜异性抗体的一种) 临床开展的用鼠源性 CD3 等克隆抗体治疗,用放射性同位素标记鼠源性抗体的影像诊断及靶 向治疗等新技术,均有可能使些病人体内产生抗鼠抗体;另外,被鼠等啮齿类动物咬伤的病 人体内也可以产生抗鼠 Ig(s)抗体。 解决的方法是:测定抗原时,在标本中加入足量的正常鼠 Ig(s),从而克服由于上述原因造 成的假阳性。 为了消除嗜异性抗体的影响,可通过在样品垫中加入正常的动物血清或纯化的鼠 IGg,又或 者在膜上喷有鼠 IGg A 线,金子中加有正常的动物血清或纯化的鼠 IGg 等等方式将嗜异性抗 体排斥在 T 线前,消除这方面的假阳。

⑤嗜靶抗原的自身抗体 抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体,有时能与靶抗原结合形成复合物,ELISA 方法中均可干扰抗原抗体测定结果。 解决的办法是:测定前需用理化方法将其解离后再测定。

6、抗凝剂和防腐剂的影响:抗凝剂(如肝素、EDTA、枸橼酸钠),防腐剂(如 NaN3)因为对离 子和蛋白活性的影响,有时会导致假阳的产生。 其他原因:血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及血液粘度过高等,均对胶体金测定结果有干 扰作用。 解决方法:表面活性剂及聚合物的使用,降低粘度,保证正常爬速。
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